李晓培 聂晓红 姜丽华 焦岩 郭佩垒 董宝剑 杨利利 袁世荧 胡强夫
，医院麻醉科（李晓培、聂晓红、郭佩垒、董宝剑、杨利利、胡强夫）；，医院麻醉科（姜丽华）；郑州，医院麻醉科（焦岩）；武汉，华中科技大学同医院麻醉学教研室（袁世荧）
国际麻醉学与复苏杂志,,38(11):-.
DOI：10./cma.j.issn.-..11.
基金项目：河南省教育厅高等学校重点科研项目
(15A)
ORIGINALARTICLES
本研究通过检测脑膜瘤干细胞标记物表达水平，探讨脑膜瘤患者术中自体血回收后所得红细胞悬液中是否含有脑膜瘤干细胞，旨在为此类患者自体血能否安全回输提供参考意见。
1 资料与方法
1.1 病例选择
经医学伦理委员会批准，选取年6月～年12月间依据临床症状、颅脑影像学检查（CT、MRI及数字脑血管造影等）确诊脑膜瘤、择期行手术治疗患者89例，患者年龄16～70岁，ASA分级Ⅱ、Ⅲ级。
1.2 麻醉和手术方法
手术与麻醉均由同一组高级职称人员完成。入室吸氧，监测ECG、SpO2、BP，常规行静脉全身麻醉诱导，气管插管机械通气，行血流动力学监测（动脉压、MAP、CVP），瑞芬太尼、丙泊酚、维库溴铵及七氟醚维持麻醉。手术显微镜下分离肿瘤，最大限度保护脑组织及重要神经、血管及毗邻功能区，尽可能全切除脑膜瘤。
1.3 自体血回收处理方法
使用一次性自体血液回收装置，回收自切皮至缝皮全程术野出血。规范化实施血液收集、离心、清洗流程，确保无菌操作。操作要点包括：①术中负压吸引力～mmHg以减低红细胞破坏；②储血罐内失血量达ml或储留时间达1h时，尽快离心处理；③通常肝素洗脱率为96%～98%，当大量失血需自体血回输时，可依据激活全血凝固时间给予鱼精蛋白中和蓄积肝素；④常规给予地塞米松20mg或甲泼尼松龙80mg，以对抗潜在过敏反应或炎性反应。
1.4 血标本检测方法
选取分离切除脑膜瘤时的肿瘤组织渗出血液（B1）、储血罐内收集的血液（B2）、离心及洗涤后的血液（B3）3组标本。
1.4.1 光学显微镜观察
3组标本用推片法制成血涂片，在光学显微镜下（4×10～40×10倍）观察细胞形态并采集图像。
1.4.2 流式细胞术直接免疫荧光法检测分化抗原簇蛋白（CD）、分化抗原簇蛋白（CD）
标本中脑膜瘤干细胞检测判断：阳性细胞率＜20%判定为该抗原表达阴性；阳性细胞率＞50%判定为该抗原表达阳性；20%～50%判定为该抗原表达弱阳性。
2 结 果
2.1 一般情况
脑膜瘤患者89例，因术中疑似污染、围手术期发生颅内感染等原因19例放弃自体血回收（9例游离切除脑膜瘤组织时操作失误未换用普通吸引器，2例术后发生颅内感染，1例术后因呼吸功能衰竭死亡，7例回收血量≤50ml未离心处理）。
最终入组70例，年龄27～70岁，平均（53±6）岁。患者术中经回收处理后得到的红细胞悬液平均为（±）ml。
2.2 光学显微镜观察结果
B1血涂片含有大量的组织碎片及红细胞等，未观察到异常形态肿瘤细胞；经储血器多层过滤后，B2血涂片中组织碎片减少，但含有部分形态异常的红细胞；经离心、分离及洗涤后收集到的B3血涂片，红细胞大小一致，变化均一，镜下未见其他异常形态细胞及组织碎片等（图1）。
2.3 流式细胞术检测结果
经流式细胞术检测分析显示：B1、B2、B3标本中，CD的阳性表达率分别为0.54%、0.43%、0.39%，差异无统计学意义；CD的阳性表达分别率为3.46%、3.58%、2.75%，差异无统计学意义；3组标本CD及CD两者均为阳性的表达率均为0（表1、图2）。
由于CD、CD阳性表达率均低于20%，因此，B1、B2、B3标本中CD及CD的表达均可视为阴性，即B1、B2、B3三组标本中均不含脑膜瘤干细胞。
3 讨 论
本研究中光镜下未观察到脑膜瘤细胞，而三阶段血液样本中亦均未检测到CD及CD的阳性表达，分析其原因如下：①脑膜瘤组织与周围正常脑组织边界常较清楚，游离切除过程中对肿瘤组织的破坏较少，即使少部分脑膜瘤细胞或组织碎片进入瘤周血液，但不含或仅含极少量的脑膜瘤干细胞；②少部分脑膜瘤细胞或组织碎片即便被吸引入储血罐，经内置孔径40μm的网式滤膜过滤拦截，再经离心、分离、洗涤，脑膜瘤细胞或组织碎片基本被滤除；③在脑膜瘤组织中，脑膜瘤干细胞含量极少（＜1％），且循环血液中只有1/万～1/亿的肿瘤细胞可能成为潜在的转移病灶。加之选取病例样本量偏少，可能会导致假阴性结果出现。
本研究不足之处在于：①入组样本量偏少，且在病例筛选时没有对脑膜瘤病理分型、临床表现、形态学差异等因素进行细分；②作为脑膜瘤干细胞的细胞标志物，CD、CD均有一定的实验局限性。
本组研究结果提示：脑膜瘤患者术中自体血回收后，经过滤、离心、分离、洗涤及净化得到的红细胞悬浮液，未检测到CD、CD的阳性表达，初步认为脑膜瘤患者术中自体血经回收处理后不含有脑膜瘤干细胞。
对于自体血回收技术，虽然近年来自体血回收装置、操作方法、配套技术均不断改进、完善，但有学者对回收血液进行光镜分析发现回收后的红细胞悬液中仍然能观察到一定数量的肿瘤细胞，表明标准处理并不能彻底清除肿瘤细胞。亦有研究指出加装白细胞滤器亦不能彻底滤除肿瘤细胞。此外有学者提出使用γ射线对红细胞悬液进行照射，以杀灭可能存在的肿瘤细胞；但γ射线治疗与危害剂量难以严格界定，对红细胞的损害难以评估，因此该思路还需探索。希冀完善自体血回收技术，尽可能滤除肿瘤细胞，提高自体血回输技术的安全性。
国际麻醉学与复苏杂志
主管：中华人民共和国
国家卫生和计划生育委员会
主办：中华医学会徐州医科大学
ISSN：-CN:32-/R
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